დ. იუ. რიაზანცევი, ე. მ. ჩუდინოვა, ლ. ი. კოკაევა, ს. ნ. ელანსკი, პ. ნ. ბალაბკო, გ. ლ. ბელოვა, ს. კ. ზავრიევი
ფიტოპათოგენური სოკო Colletotrichum coccodes იწვევს საშიშ დაავადებებს კარტოფილსა და პომიდორში, რომლებიც ცნობილია ანტრაკნოზისა და ტუბერკულოზის შავი ლაქის სახით. მორფოლოგიური მახასიათებლების მიხედვით, ისინი ხშირად ძნელია განასხვავონ სხვა მიკროორგანიზმებით გამოწვეული დაავადებებისგან; მწვანე პომიდვრის ხილზე, დაავადება შეიძლება ასიმპტომური იყოს, რაც მხოლოდ მწიფე წითელ ხილზე ვლინდება. პათოგენის სწრაფი და ზუსტი დიაგნოზისთვის, რეალურ დროში PCR ტესტის სისტემა შემოთავაზებულია. საცდელი სისტემის შესაქმნელად განისაზღვრა გლიცერინის ტრიფოსფატდეჰიდროგენაზას გენის ნუკლეოტიდთა თანმიმდევრობა 45 ც. კოკოდების შტამებში, რომლებიც იზოლირებულია კარტოფილის ტუბერებიდან რუსეთის სხვადასხვა რეგიონში.
მიღებული შედეგების და GenBank მონაცემთა ბაზაში არსებული სხვა სახეობების მსგავსი მიმდევრობის ანალიზის საფუძველზე შეიქმნა სპეციფიკური სახეობების პრაიმერები და გამოძიება C. coccodes- ისთვის. შექმნილი ტესტური სისტემის სპეციფიკის შესამოწმებლად, PCR ჩატარდა 15 სხვადასხვა სახეობის პარაზიტული და საპროტროფული სოკოების სუფთა კულტურებიდან იზოლირებული ტომატისა და კარტოფილის მცენარეებთან (Fusarium oxysporum, F. verticillium, Phomopsis Phaseoli, Alternaria alternata, Helminthosporium solani, Colletotrichum coccodes) Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Helminthosporium solani, Phomopsis fazoli, Neonectria radicicola, Rhizoctonia solani, Penicillium sp., Cladosporium fulvum, C. cladosporioides). Colletotrichum კოკოდების დნმ-ის არსებობა განისაზღვრა 20-27 ბარიერ ციკლზე, ხოლო სხვა სახეობები 40 ციკლის შემდეგ გამოვლინდა ან არ იქნა აღმოჩენილი. ტესტის სისტემა საშუალებას იძლევა საიმედოდ დავადგინოთ C.coccodes დნმ-ის კონცენტრაცია 0.01 ნგ / მმ 3-ზე მეტი ანალიზირებულ PCR ნარევში. შემუშავებული ტესტური სისტემის გამოყენებით გამოკვლეულია სოკოვანი დაავადებების სიმპტომებით და კარტოფილის ბოლქვებში ტომატის ფოთლებში C. კოკოდების არსებობა დაავადების გარე სიმპტომების გარეშე. სოკოვანი ინფექციის სიმპტომებით ფოთლები შეაგროვეს კრასნოდარის მხარეში ორი სხვადასხვა ველიდან, ტუბერები - კოსტრომის, მოსკოვის, კალუგას, ნიჟნი ნოვგოროდის რეგიონების მინდვრებიდან. კრასნოდარის მხარეში აღმოჩნდა პომიდვრის ერთი ფოთოლი, რომელიც შეიცავს C. coccodes დნმ-ს; ამ პათოგენის დნმ-ის მნიშვნელოვანი არსებობა დაფიქსირდა ტუბერების 5 ნიმუშში, რომლებიც გაიზარდა კოსტრომის, მოსკოვის, კალუგის რეგიონებში.
შესავალი
Colletotrichum გვარის სოკოები საშიში ფიტოპათოგენებია, რომლებიც გავლენას ახდენენ მარცვლეულზე, ბოსტნეულზე, მწვანილზე, მრავალწლიან ხილსა და კენკროვან მცენარეებზე. ამ გვარის ერთ-ერთი საყოველთაო სახეობა Colletotrichum coccodes (Wallr).
ჰიუზი, არის ანტრაკნოზისა და კარტოფილისა და პომიდვრის შავი ლაქის გამომწვევი აგენტი და იწვევს სოლანასებრთა ოჯახის რიგი სხვა მცენარეების დაავადებებს, მათ შორის. სარეველები (Dillard, 1992). C. coccodes აზიანებს მცენარის ყველა მიწისქვეშა ნაწილს, ღეროს ფუძეებს, ფოთლებს და ნაყოფებს (Andrivon et al., 1998; Johnson, 1994). ინფიცირებული კარტოფილის ბოლქვებზე შეინიშნება გაურკვეველი მკვეთრად გამოხატული კიდეების ნაცრისფერი ლაქების განვითარება, რომელზეც აშკარად ჩანს სპორირებისა და მიკროსკლეროტიის შავი წერტილები. შენახვის დროს, ტუბერების რბილობში შეიძლება ჩამოყალიბდეს დარბილებული შინაარსის წყლულები, ე.ი. დაავადება შედის ანტრაკნოზის ფაზაში, რაც, თუმცა, ძალზე იშვიათია.
ამავე დროს, ანთრაკნოზის სიმპტომები (კანის წყლულები მცირე შავი წერტილებით) დამახასიათებელია ტომატის ხილზე. ფოთლებზე, C. კოკოდების სიმპტომები ჩნდება მუქი ყავისფერი ლაქების სახით, რომლებიც ჩვეულებრივ ესაზღვრება ყვითელი ქსოვილით (ჯონსონი, 1994).
ტუბერებზე შავი ლაქის განვითარება აფუჭებს მათ გარეგნობას, რაც განსაკუთრებით გამოხატულია გარეცხილი წითელი კანიანი კარტოფილის გაყიდვისას. პილინგის აქერცვლა იწვევს ზედმეტ აორთქლებას და გაზრდის შენახვის დანაკარგებს (Hunger, McIntyre, 1979). მცენარის სხვა ორგანოების დაზიანება იწვევს მოსავლიანობის დაკარგვას, რაც აღინიშნა როგორც ღია, ისე დახურულ ადგილზე (Johnson, 1994; Tsror et al., 1999). C.coccodes- ით გამოწვეული დაავადებები გავრცელებულია მსოფლიოს თითქმის ყველა კარტოფილის მწარმოებელ რეგიონში, მათ შორის რუსეთში (Leesa, Hilton, 2003; Belov et al, 2018). ამ დაავადებების კონტროლი რთულია არსებული ფუნგიციდების არასაკმარისი ეფექტურობის გამო C. კოკოდებისა და რეზისტენტული ჯიშების ნაკლებობის გამო (წაიკითხეთ, დაიმალეთ, 1995).
C. coccodes ინოკულა შეიძლება შენარჩუნდეს თესლის ბოლქვებში (წაიკითხეთ, დაიმალეთ, 1988; ჯონსონი და სხვ., 1997), პომიდვრის თესლი (ბენ-დანიელი და სხვები, 2010), დიდხანს გადარჩეს ნიადაგში, მცენარეულ ნამსხვრევებზე (Dillard, 1990 ; Dillard, Cobb, 1993) და სარეველებში (Raid, Pennypacker, 1987). რიგი ავტორების ნაშრომებმა (წაიკითხე, დაიმალე, 1988; ბარკდოლი, დევისი, 1992; ჯონსონი და სხვ., 1997; Dillard, Cobb, 1993) აჩვენა, რომ კარტოფილისა და პომიდვრის დაავადების განვითარება დიდწილად დამოკიდებულია თესლში თესლის არსებობაზე და ნიადაგი. ამიტომ, დაავადებისგან დანაკარგების მინიმიზაციის მიზნით, საჭიროა დიაგნოზირდეს (რაოდენობრივი ჩათვლით) სოკოს პროპულაები სათესლე მასალაში, ნიადაგში, სათესლე კარტოფილის ბოლქვებში და დასაწყობად დაგებული ტომატის თესლებში. ნიადაგისა და მცენარეული მასალების მორფოლოგიური დიაგნოსტიკა შეიძლება ჩატარდეს მხოლოდ მიკროსკლეროტიის არსებობით, რაც სხვა სახის სოკოებშიც გვხვდება.
ტუბერებზე სიმპტომები ძალიან ჰგავს ვერცხლისფერი ქერქს, რომელსაც იწვევს სოკო Helminthosporium solani. Colletotrichum კოკოდების და Helminthosporium solani სუფთა კულტურაში გამოყოფა საკმაოდ რთულია და დიდხანს საჭიროებს საკვებ გარემოში ნელი ზრდის გამო. Colletotrichum კოკოდების სწრაფად იდენტიფიცირებისთვის საჭიროა ინსტრუმენტული დიაგნოსტიკური მეთოდების გამოყენება. ყველაზე მოსახერხებელი მეთოდია პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქცია (PCR) და მისი მოდიფიკაცია - რეალურ დროში PCR. ამჟამად, ევროპასა და შეერთებულ შტატებში გამოიყენება ბრიტანელი მკვლევარების (Cullen et al., 2002) მიერ შემუშავებული ტესტის სისტემა rDNA– ს ITS1 რეგიონისთვის. მისმა გამოყენებამ კარგი შედეგები აჩვენა რუსული იზოლაციების ანალიზში (ბელოვი და სხვები, 2018). ამასთან, C. coccodes ძალზე ცვალებადია და მისი გამოვლენა დნმ – ის ერთი თანმიმდევრობიდან შეიძლება გამოიწვიოს ცრუ უარყოფითი შედეგები. უფრო საიმედო დიაგნოზისთვის საჭიროა ანალიზი რამდენიმე სახეობის სპეციფიკური დნმ თანმიმდევრობისთვის, ამასთან დაკავშირებით ჩვენ შევიმუშავეთ ორიგინალური ტესტი სისტემა, რომელიც საშუალებას გვაძლევს დავადგინოთ C. კოკდები გლიცერალდეჰიდი-3-ფოსფატდეჰიდროგენაზას გენის თანმიმდევრობით.
მასალა და მეთოდი
შექმნილი სატესტო სისტემების ეფექტურობისა და სპეციფიკის შესაფასებლად გამოვიყენეთ 15 სახეობის სოკოების სუფთა კულტურები, რომლებიც ავტორებმა გამოყვეს ტომატის ფოთლებისა და ხილის დაავადებული ნიმუშებიდან, კარტოფილის ბოლქვებიდან (ცხრილი 1). იზოლაციისთვის, სოკოვანი ინფექციის სიმპტომების მქონე მცენარეების ორგანოები მიიღეს, არაუმეტეს ერთი ორგანო თითო ბუჩქზე.
ტუბერის ნაჭერი ქერქით, პომიდვრის ნაყოფის ნაჭერი და დაზარალებული ფოთოლი მოათავსეს ბინოკულარული მიკროსკოპის ქვეშ, რის შემდეგაც მიცელიუმი, სპორები ან ქსოვილის ნაჭერი გადაიტანეს აგარის გარემოში (ვორტის აგარი) პეტრის ჭურჭელში გამჭოლი საჭრელი ნემსით. იზოლატები ინახებოდა აგარის დახრილზე სინჯარაში 4 ° C ტემპერატურაზე.
ტომატის ფოთლების ნიმუშები სოკოვანი დაავადებების სიმპტომებით, რომლებიც ანალიზისთვისაა განკუთვნილი, შეგროვებისთანავე (მინდორში) მოთავსდა 70% ეთილის სპირტში, რომელშიც ინახებოდა დნმ-ის იზოლაციამდე. კარტოფილის ტუბერები მიიტანეს ლაბორატორიაში, გამოიწმინდეს მათგან (2 × 1 სმ ნაჭერი) და გაყინეს –20 ° С. ინახება გაყინული დნმ-ის იზოლაციამდე.
სოკოების სუფთა კულტურები დნმ-ის იზოლაციისთვის გაიზარდა თხევადი ბარდის გარემოში. სოკოს მიცელიუმი ამოიღეს თხევადი გარემოდან, გამხმარი ფილტრის ქაღალდზე, გაყინეს თხევად აზოტში, ჰომოგენიზებული, ინკუბაციით CTAB ბუფერში, გაწმინდეს ქლოროფორმით, ალექსინეს იზოპროპანოლის ნარევით და 0.5 მ კალიუმის აცეტატით და ორჯერ გარეცხეს 2% სპირტით. მიღებული დნმ დაიხსნა დეიონიზებულ წყალში და ინახება –70 ° С– ზე (კუტუზოვა და სხვები, 20). დნმ-ის კონცენტრაცია გაზომეს HS დნმ-ის რაოდენობრივი განსაზღვრის ნაკრების გამოყენებით ორმაგი ჯაჭვური დნმ-ისთვის Qubit 2017- ზე (Qiagen, გერმანია). ალკოჰოლიზირებული და გაყინული ნიმუშები გახეხეს თხევად აზოტში, შემდეგ ჩატარდა დნმ-ის ექსტრაქცია, როგორც ზემოთ აღწერილი იყო (სუფთა სოკოვანი კულტურების მიცელიუმისთვის).
ცხრილი 1. გამოყენებული სოკოების შტამების წარმოშობა
სოკოს სახელი | მცენარე, ორგანო | შერჩევის ადგილი |
---|---|---|
Colletotrichum coccodes 1, C. coccodes 2, C. coccodes 3, Ilyonectria crassa, Rhizoctonia solani | კარტოფილის ტუბერი | კოსტრომის რეგიონი, 1 დარგის თაობის კარტოფილის ტუბერები, ჯიში წითელი სკარლეტი |
Colletotrichum კოკოდები 4 | კარტოფილის ფოთოლი | რეპ. მარი ელ, იოშკარ-ოლა |
Helminthosporium solani | კარტოფილის ტუბერი | მაგადანის მხარე, pos. კარავი, კარტოფილის ტუბერი |
Cladosporium fulvum | ტომატის ფოთოლი | მოსკოვის რეგიონი, მსხვილი ხილის პომიდორი |
ალტერნატია ტომატოფილია | ტომატის ხილი | გადასცა მცენარეთა დაცვის ყველა რუსული კვლევითი ინსტიტუტის მიკოლოგიისა და ფიტოპათოლოგიის ლაბორატორიის თანამშრომლებმა |
Fusarium verticillium, Phomopsisphaseoli, Alternaria alternata, Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Cladosporium cladosporioides, Acrodontium luzulae, Penicillium sp. | ტომატის ხილი | კრასნოდარის მხარე, კრიმსკის რაიონი, კლასის კრემი |
Fusarium oxysporum | ხორბლის ფესვი | მოსკოვის რეგიონი |
PCR ჩატარდა DTprime გამაძლიერებელზე (დნმ-ტექნოლოგია). PCR– სთვის გამოიყენეს გლიცერინის ტრიფოსფატდეჰიდროგენაზას გენის სპეციფიკური რეგიონის ორიგინალი პრაიმერები და გამოკვლევა: პრაიმერი Coc70gdf –TCATGATATCATTTCTCTCACGGCA, უკუ პრაიმერი Coc280gdr - TACTTGAGCATGTAGGCCTGGGT1. პრაიმერები აძლიერებენ 213 bp რეგიონს.
ამ რეაქციამ მიიღო 50 ნგ მთლიანი დნმ (ფოთლებისა და ტუბერების ანალიზის დროს) და 10 ნგ (სოკოების სუფთა კულტურების დნმ-ის ანალიზში). რეაქციის ნარევი (35 მკლ) პარაფინის შრით გამოიყო ორ ნაწილად: ქვედა (20 მკლ) შეიცავს 2 მკლ 10 × რეაქციის ბუფერს (750 მმ Tris-HCl, pH 8.8; 200 მმ (NH4) 2SO4; 25 მმ MgCl2; 0.1% შუალედური- 20), თითოეული დეოქსინუკლეოტიდის ტრიფოსფატის 0.5 მმ, თითოეული პრაიმერის 7 პმოლი და ჰიდროლიზირებადი ფლუორესცენტური ზონდის 4 მლპol; ზედა ნაწილში შეიტანეს 1 მკლ 10 × PCR ბუფერული და 1 U Taq პოლიმერაზა.
ნარევის გამოყოფა პარაფინთან საშუალებას აძლევს მილებს დიდი ხნის განმავლობაში შეინახონ 5 ° C ტემპერატურაზე და უზრუნველყონ PCR– ს ცხელი დაწყება 10 წუთის განმავლობაში მათი 80 ° C ტემპერატურაზე გათბობის შემდეგ. PCR შესრულდა შემდეგი პროგრამის შესაბამისად: 94.0 ° C - 90 s (1 ციკლი); 94.0 ° C - 30 წმ; 64.0 ° C - 15 წმ (5 ციკლი); 94.0 ° C - 10 წმ; 64.0 ° C - 15 წმ (45 ციკლი); 10.0 ° C - შენახვა.
შედეგები და დისკუსია
გლიცეროლის ტრიფოსფატდეჰიდროგენაზას გენის თანმიმდევრობა განისაზღვრა 45 შტამში, რომელიც იზოლირებულია ფოთლების, ღეროების, კარტოფილის ტუბერებიდან და პომიდვრის ხილისგან (კუტუზოვა, 2018) რუსეთის სხვადასხვა რეგიონში. ყველა შტამის შესწავლილი თანმიმდევრობა იყოფა 2 ჯგუფად, რომლებიც განსხვავდება ორი ნუკლეოტიდით. ორივე ჯგუფის წარმომადგენელთა ნუკლეოტიდების მიმდევრობა ნომრებით KY496634 და KY496635 ინახება GenBank- ში.
პრაიმერები coc70gdf, coc280gdr და cocgdz ზონდი, რომლებიც მათ საფუძველზე შეიქმნა, შემოწმდა BLAST პროგრამის გამოყენებით (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) Colletotrichum- ის გვარის და სხვა ორგანიზმების გლიცერინის ტრიფოსფატი დეჰიდროგენაზას გენის ყველა თანმიმდევრობით GenBank მონაცემთა ბაზაში.
სხვა ორგანიზმების დნმ – ის რეგიონები არ იქნა ნაპოვნი პრაიმერების და გამოკვლევების ძალიან ჰომოლოგიური.
ტესტის სისტემის მგრძნობელობა შემოწმდა C.coccodes დნმ-ის სხვადასხვა კონცენტრაციის ნიმუშებით, ანტრაკნოზით ინფიცირებული კარტოფილის ფოთლის დნმ-ით (შეგროვდა 2017 წელს Mari El- ში, ჯიშის წითელი სკარლეტი) და შავი ლაქით დაზარალებული ტუბერების ქერქით (შეგროვდა კოსტრომის რეგიონში, ჯიშის წითელი სკარლეტი, ცხრილი 2). ტუბერკულოზსა და კარტოფილის ფოთლებში დნმ-ის არსებობის დასადასტურებლად, C. coccodes შტამები გამოიყოფა მათგან სუფთა კულტურებად.
ტესტის სისტემის მგრძნობელობის ანალიზის შედეგები აჩვენებს, რომ ის შეიძლება გამოყენებულ იქნას C. coccodes დნმ-ის არსებობის წარმატებით დიაგნოზირებისთვის, როდესაც PCR ნარევში მისი საერთო შემცველობა 0.05 ნგ-ზე მეტია. ეს სავსებით საკმარისია გამოვლენისთვის, ვინაიდან ერთი სკლეროტია შეიცავს საშუალოდ 0.131 ნგ-ს, ხოლო ერთი სპორა შეიცავს დაახლოებით 0.04 ნგ დნმ-ს (Cullen et al., 2002). ინგლისურმა ჯგუფმა (Cullen et al., 2002) შემუშავებულმა ტესტის სისტემამ ანალოგიური მგრძნობელობა აჩვენა (ბარიერი ციკლი 34 0.05 ნგ დნმ-ზე, 37 კი 0.005 ნგ).
C. კოკოდების შემცველი ბუნებრივი ნიმუშების ანალიზმა ყველა შემთხვევაში შესაძლებელი გახადა მისი არსებობის საიმედოდ გამოვლენა ნიმუშიში (ცხრილი 2). დნმ-ის იზოლაციის შემოთავაზებული მეთოდი ასევე გამოიყენებოდა ბუნებრივი მცენარეების ნიმუშების ანალიზისთვის.
ცხრილი 2. შემოთავაზებული ტესტური სისტემის მგრძნობელობის განსაზღვრა Colletotrichum კოკოდების იდენტიფიკაციისთვის რეალურ დროში PCR
ნიმუში | დნმ-ის რაოდენობა ნიმუშში *, ნგ | ბარიერის ციკლი | C. კოკოდების გამოვლენა |
---|---|---|---|
Mycelium Colletotrichum კოკოდები | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
ტუბერის კანი 1 | 50 | 32 | + |
ტუბერის კანი 2 | 50 | 30 | + |
ტუბერის კანი 3 | 50 | 31.5 | + |
კარტოფილის ფოთოლი | 50 | 29.5 | + |
Შენიშვნა. * PCR პროდუქტების ნარევში.
ტესტის სისტემის სპეციფიკა შემოწმდა 15 სახეობის სოკოდან მოპოვებულ დნმ-ის ნიმუშებზე. სოკოების ყველა შტამი გამოიყო ავტორების მიერ დაზარალებული და ჯანმრთელი ხილისა და ტომატის, კარტოფილის ტუბერების ფოთლებისგან; ხორბლის ფესვისგან იზოლირებული იქნა ერთი შტამი (ცხრილი 1). ნაყოფის ზედაპირიდან იზოლირებულთა შორის არის ისეთი სახეობები, რომლებიც არ არიან პათოგენური პომიდვრისთვის (მაგალითად, Phellinus ferrugineovelutinus).
გამოკვლევებმა აჩვენა, რომ C. coccodes დნმ დაფიქსირდა 20-27 ბარიერ ციკლზე, ხოლო სხვა სოკოვანი სახეობები არ იქნა აღმოჩენილი ან მისცეს სიგნალი 40-ე ციკლის შემდეგ, რაც შეიძლება მიეკუთვნოს არასპეციფიკური ხმაურის ეფექტს (ცხრილი 3).
ცხრილი 3. სხვადასხვა ტიპის სოკოს ტესტური სისტემის შემოწმება
სოკოს სახელი | ბარიერის ციკლი |
Colletotrichum კოკოდები 1 | 20.9 |
C. კოკოდები 2 | 22.6 |
C. კოკოდები 3 | 23 |
C. კოკოდები 4 | 22 |
Fusarium oxysporum | > 40 |
F. ვერტიკლიუმი | > 40 |
Rhizoctonia solani | > 40 |
Phomopsis ფაზოლი | > 40 |
Alternaria alternata | > 40 |
A. ტომოტოფილა | > 40 |
Helminthosporium solani | > 40 |
Phellinus ferrugineovelutinus | > 40 |
Stemphylium vesicarium | > 40 |
Ilyonectria crassa | > 40 |
Cladosporium cladosporioides | > 40 |
C. ფულვუმი | > 40 |
Acrodontium luzulae | > 40 |
Penicillium sp. | > 40 |
Შენიშვნა. * დნმ-ის რაოდენობა ყველა ნიმუშში იყო 10 ნგ.
შემუშავებული ტესტის სისტემა გამოიყენეს C. coccodes- ის დასადგენად პომიდვრის ფოთლის ნიმუშებში, ნეკროტროფული პათოგენების სიმპტომებით და სათესლე კარტოფილის ბოლებით, ხილული სიმპტომების გარეშე. კვლევისთვის ავიღეთ სხვადასხვა ჯიშის თესლის ბოლქვები, რომლებიც გაიზარდა კოსტრომის, მოსკოვის, კალუგას, ნიჟნი ნოვგოროდის რეგიონებში. C. coccodes დნმ-ის არსებობა მნიშვნელოვნად იქნა მიჩნეული ნიმუშებში, რომელთა ანალიზის დროს ბარიერი ციკლი არ აღემატებოდა 35-ს. ეს ბარიერი შეირჩა C. coccodes დნმ-ის 0.05 ნგ-ს საიმედო განსაზღვრის საფუძველზე (ბარიერი ციკლი 33.5, ცხრილი 2) და იმის გათვალისწინებით, რომ დიაგნოზირებულია სოკოების ზოგიერთი სხვა სახეობის არასპეციფიკური დნმ-ის 40-ზე ზემოთ ბარიერი ციკლი. ამ მიდგომით, C. coccodes დნმ-ის მნიშვნელოვანი არსებობა დაფიქსირდა ტუბერების 5 ნიმუშში, რომლებიც გაიზარდა კოსტრომაში, მოსკოვში, კალუგას რეგიონებში და კრასნოდარის რეგიონის იეისკის რაიონის ტომატის ერთ ფოთოლში (ცხრილი 4, 5).
ცხრილი 4. Colletotrichum კოკოდების გამოვლენა კარტოფილის ბოლქვებზე *
ნიმუშის ნომერი | მრავალფეროვანი კარტოფილი | ზრდის ადგილი | C. კოკოდების გამოვლენა | ბარიერის ციკლი |
---|---|---|---|---|
1 | წითელი ალისფერი | კოსტრომის მხარე | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | სანტე | მოსკოვის რეგიონი | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | ჟუკოვსკის დასაწყისში | მოსკოვის რეგიონი | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | მოლი | კალუგას მხარე | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | ფენტეზი | კალუგას მხარე | - | |
15 | გალა | ნიჟნი ნოვგოროდის რეგიონში. | - | |
16 | - |
Შენიშვნა. * დნმ-ის რაოდენობა ყველა ნიმუშში იყო 50 ნგ.
ცხრილი 5. პომიდვრის ფოთლებზე Colletotrichum კოკოდების გამოვლენა *
ნიმუშის ნომერი | ზრდის ადგილი | C. კოკოდების გამოვლენა | ბარიერის ციკლი |
---|---|---|---|
1 | კრასნოდარის მხარე, ყირიმის ოლქი | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | კრასნოდარის მხარე, იეისკის ოლქი | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* დნმ-ის რაოდენობა ყველა ნიმუშში იყო 50 ნგ.
ჩვენს მიერ შექმნილი ტესტური სისტემა არ ჩამოუვარდება ბრიტანელი მკვლევარების (Cullen et al., 2002) მიერ შემუშავებულ სენსიტიურობასა და სპეციფიკას და შესაფერისია მცენარის ნიმუშების ანალიზისთვის. მისმა გამოყენებამ თესლის ტუბერების ანალიზისთვის შესაძლებელი გახადა C. coccodes დნმ ტუბერებში დაზიანების გარე ნიშნების გარეშე და წარმატებით გაეანალიზებინა ფოთლების ინფექცია.
დღეისათვის რუსეთში არ ჩატარებულა კარტოფილის ტუბერების ანალიზი C. კოკოდების დაინფიცირებისთვის. ჩვენმა პირველმა კვლევამ აჩვენა, რომ რუსეთის ფედერაციის სხვადასხვა რეგიონში მოყვანილი 16 ტესტირებული სათესლე ბოლქვიდან 5 შეიცავს C. კოკოდებს. ეს გვიჩვენებს, რომ კარტოფილის ტუბერების შავი ლაქა რუსეთში გავრცელებული კარტოფილის დაავადებაა და მისი როლი კარტოფილის კულტურის მოცულობისა და ხარისხის შემცირებაში სათანადოდ არ არის შეფასებული.
პომიდვრის ფოთლების ანალიზმა გამოავლინა კ.კოკოდების დნმ-ის მნიშვნელოვანი არსებობა კრასნოდარის ტერიტორიის იეისკის რაიონიდან ერთ ფოთოლში. მანამდე, სამხრეთ რუსეთში პომიდვრის მინდვრების გამოკვლევისას, ბრიტანული ტესტის სისტემის გამოყენებით (Cullen et al., 2002), აღმოჩენილია C. coccodes შემცველი ფოთლები, ხოლო ზოგიერთ სფეროში აღმოჩნდა C. coccodes- ით ინფიცირებული ფოთლების მაღალი წილი (ბელოვი და სხვები, 2018) კრასნოდარისა და პრიმორსკის ტერიტორიებზე, მოსკოვის რეგიონში, აღმოვაჩინეთ ტომატის ხილი, საიდანაც მოვახერხეთ C. coccodes- ის სუფთა კულტურების გამოყოფა. შესაძლებელია რუსეთში პომიდორზე C. coccodes ბევრად უფრო გავრცელებულია, ვიდრე ახლა ითვლება და მისი მავნებლობაც სათანადოდ არ არის შეფასებული.
ამრიგად, დღეისათვის საკმარისი ინფორმაციაა დაგროვილი კარტოფილსა და პომიდორზე C. კოკოდების ფართოდ გავრცელების შესახებ.
იმისათვის, რომ უკეთ გავიგოთ ამ სოკოს როლი კარტოფილისა და პომიდვრის დაავადებების განვითარებაში, აუცილებელია რუსეთში მისი გავრცელების კონტროლი, ნიადაგისა და თესლის ინფექციების როლის შესწავლა და შავი ლაქის როლი შენახვის დროს დანაკარგებში. PCR დიაგნოზის გამოყენებამ მნიშვნელოვნად შეუწყო ხელი ამ სამუშაოს და ორივე ტესტის სისტემის ერთდროული გამოყენება მნიშვნელოვნად გაზრდის ანალიზის სიზუსტეს.
ამ ნამუშევარს მხარი დაუჭირა რუსეთის სამეცნიერო ფონდის No 18-76-00009 გრანტმა.
სტატია გამოქვეყნდა ჟურნალში "Mycology and Phytopathology" (ტომი 54, No1, 2020).